PCR实验(experiment)室设计的核心(core)问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验(experiment)就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验(experiment)结果必须作废,需重新进行实验(experiment)。所以发生污染后再围绕(circumfuse)实验(experiment)室来寻找污染源不但耗时而且繁琐(fán suǒ),浪费人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除(Remove)。
实验(experiment)室空调通风系统设计及压力控制(control)
PCR实验(experiment)室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能(maybe)性,宜采用全送全排的气流组织形式。实验室净化由于洁净实验室-生物安全实验室内操作对象是危险性的微生物,对人体、动植物或环境具有危害,必须通过采用合理的空气调节系统,保持洁净实验室-生物安全实验室的相对负压环境无论何时都不被破坏,以保证实验室内危险性微生物不能向外部环境中扩散。同时,要严格控制(control)送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。 2.1试剂贮存和准备区
该实验(experiment)区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原料(raw material)必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。 对与气流压力的控制(control),本区并没有严格的要求。
标本制备区
该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增产物 分析(Analyse)区
试剂贮存和准备区
标本制备区
扩增反应混合物配制和扩增区
缓 冲 区
传递(transmission)窗
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。净化实验室控制系统是整个洁净实验室安全运行的神经中枢,由于洁净实验室-生物安全实验室的实验对象是危险性的微生物,出于严格控制污染的原则,它要求以最少的维护人员,运用最优化的管理维护手段,来实时监控每一个实验室中设备所处的物理环境,保证实验室运行过程中始终处于相对负压环境,防止危险性微生物外泄。另外,由于在加样操作中可能(maybe)会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
扩增产物分析(Analyse)区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。净化实验室必须控制实验室的洁净度,对新风进行过滤,使实验室达到一定的净化要求。其中排风系统是重点,对于保证实验室相对负压环境和有效过滤室内污染排风起着重要的作用。
本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。